一、根据外阴部变化：马尔济斯母犬发情后阴户有明显变化。先是阴唇横径逐渐增大，并且逐渐变的柔软。但在排卵前阴唇横径急剧缩小，接着再度增大又再度缩小，当阴唇横径每二次缩小时，即为排卵时间。在开始排卵后的48小时内，可排出80%的卵子，排出的卵子在输卵管内存活4～8天，保持受精能力4～5天。因此，阴唇横径每二次缩小后2～4天是最好的配种日期。
二、根据发情初始期推断：多数母犬可依阴道第一次流血（俗称见红）之日定为发情初始期。初产犬一般在“见红”后第12到13天配种，而经产犬一般在“见红”后9到11天首次交配。有些老龄经产母犬，甚至能在“见红”后6到7天受孕，而有些青壮年犬的配种日期可延迟到“见红”后的13～15天首配。通常以“见红”第12天为基本参照数，母犬年龄每增加2岁或胎次增加2窝，其首配时间提前1天。 三、根据试情表现：发情初始期难以确定的母犬，可用试情方法确定配种最佳日期。如果母犬喜欢接近公犬，遇公犬时频频排尿，愿意接受公犬趴跨时；或用手按压母犬臀部，其尾根抬起偏向一侧，阴唇外翻频频开闭时；或是母犬阴道分泌物由红色变为稻草黄时，当见到上述三种表现后，1～3天即为最佳配种日期。 四、根据阴道粘液检查：取阴道粘液涂片，置显微镜下观察角化细胞的数量，当角化细胞达到80%以上时，即为配种最佳日期。因为此角化细胞在休情期还不足10%，进入发情期后才逐渐增多。此外，多数学者认为首配后的母犬，可间隔1～2天重复配（用同一公犬）或双重配（用另一公犬）一次，以提高受胎率和产仔率。
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