三道眉草鹀可以人工繁殖，三道眉草鹀在中国东北地区4月间分散到巢区进行配对，5月初营巢，5月中下旬孵卵， 6月末7月初孵第二窝卵。巢一般筑于山坡草丛地面，极少数在灌丛小树上，但在南方也筑在小松树上或茶树上，或筑于溪边，田边小而密的荆棘丛中，极少在高树上。在庐山巢多营造在茶园、菜地、道旁及住宅旁的灌丛和荆棘丛中。
仅雌鸟筑巢，4-5 天完成。巢呈碗状，巢外壁主要为禾本科草茎;少量落叶松针、蒿草、锈线菊叶等;内壁多为植物须根、细草茎等;内垫少量兽毛、亚洲发衣等。巢由禾本科植物茎和叶构成，有的巢材混有须根，内垫须根和兽毛等。
每年一窝。巢筑完后，当天或隔一天开始产卵。内置4至5枚卵，卵壳色泽变化很大，但同一窝却基本相似。卵椭圆形，白色或乳白色，钝端有蝌蚪状黑斑联成环状，其他部位少有斑点。或乳白浅蓝色;斑多丝发状，底层浅紫色，表层为黑褐色及浓黑色，密集于卵的钝端绕成一宽环，其余各处偶有零星的棒状或点状斑。
雌鸟孵化，期限为12-13天。雏鸟一般1-2天出齐，留巢期为10-112天，两性育雏，幼鸟离巢后在亲鸟带领下，在巢区附近游荡3-5天。8月末形成同种群，每群数量为10-20多只，多在食物丰富的灌丛、草甸中活动。冬季在公路旁、灌丛、草甸中活动，为同种群，每群一般5-10只。
